Создание дизайн-шаблонов; уроки Photoshop, Illustrator, Lightroom, Gimp; обои для рабочего стола; иконки и headers для блогов.
Главная Фотоальбом Обо мне Карта блога
Подпишись на RSS!

Пцр диагностика туберкулеза у детей


ПЦР диагностика туберкулеза - суть метода, плюсы и минусы

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

  • Кровь.
  • Слюна.
  • Мокрота.
  • Выделения из половых органов.
  • Смывная жидкость бронхов.
  • Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

  1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
  2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
  3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

  • Длительный контакт с больным туберкулезом.
  • Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
  • Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
  • Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
  • ВИЧ-инфекция.
  • Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
  • Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

  • Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
  • Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
  • Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
  • Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
  • Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
  • Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Требования к ПЦР-лаборатории

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

  • Зона приемки и сортировки проб.
  • Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
  • Зона проведения реакционных проб.
  • Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

  • Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
  • Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
  • ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
  • С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
  • Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
  • Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
  • Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
  • ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
  • Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

  • Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
  • Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
  • При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
  • Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
  • Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

tuberculosis.su

ПЦР диагностика туберкулеза у детей и взрослых

Современные методы диагностики (пцр, диаскинтест, квантифероновый тест) обладают высокой эффективностью, но на практике исследования не проверены. Туберкулинодиагностика была основой для выявления инфицированных и больных людей.

Способ позволил выявить много больных людей, снизить статистику заболеваемости, смертности.

Посев на микобактерии и микроскопия мокроты по Цилю-Нельсону позволяет достоверно диагностировать инфекцию. Проблема вызывает точное взятие мокроты прямо из пораженного бронха. На фоне туберкулезного процесса поражается значительная часть бронхиального дерева. После бактериального посева возможно проведение пробы на чувствительность возбудителя к антибиотику.

После анализа результатом диагностики фтизиатрам стало ясно, что отсутствие выделения палочки Коха не означает отсутствие инфицирования организма. Возбудитель может определяться после второго, третьего, четвертого взятия материала.

Современные диагностические методы (дст, Квантифероновый тест) выявляют микобактерии при активном течении заболевания. При наличии микобактерий внутри лимфатических узлов, при внелегочных формах заболевания тесты чаще всего отрицательны.

Своевременная диагностика составляет основу предотвращение серьезных осложнений и опасных последствий заболевания.

Современные методы

Заменой классической туберкулинодиагностике является диаскинтест (дст). Согласно последним постановлениям исследование должно заменить стандартную пробу Манту, которая позволила выявить много случаев заболеваемости, инфицированности среди населения.

Суть диаскинтеста, как и туберкулинодиагностики, предполагает подкожное введение белков возбудителей туберкулеза. В ответ на инъекцию вырабатывается реакция гиперчувствительности со специфическими кожными изменениями: покраснение, уплотнение, образование пузырей.

Положительный результат диаскинтеста характерен для пациентов с активным течением заболевания. При инфицировании или повышенной аллергизации исследование будет отрицательным. Отрицательный эффект дст может быть результатом сильного иммунитета, но при инфицировании человека.

При сравнении с Манту диаскинтест является более универсальным и чувствительным способом диагностики туберкулеза. Отсутствие выявления инфицированности требует его применения одновременно с туберкулинодиагностикой.

Несмотря на результаты клинических испытаний дст, ученые утверждают об общей универсальности и чувствительности способа, нельзя считать исследование универсальным диагностическим решением.

Разработан тест академиками НИИ Сеченова. Отсутствие аллергии при использовании диаскинтеста объясняется подкожным введением видоспецифичных туберкулезных белков. После их введения определяется кожная реакция в виде покраснения, уплотнений.

Лапароскопия яичников – операция для удаления кисты

Что такое квантифероновый тест

Квантифероновый тест оценивается после взятия крови больного. Механизм действия процедуры заключается в определении гамма-интерферона, который высвобождается Т-лимфоцитами после встречи с микобактериями туберкулеза. Тесты определяют туберкулезные белки, которые содержат не только бактерии человечьего и бычьего типов. Квантифероновый тест можно использовать также для диагностики микобактериозов, провоцируемых другими микобактериями, которые формируют специфические изменения на рентгенограмме. Результат теста определяется в нескольких пробирках, что повышает диагностическую чувствительность метода.

ПЦР для диагностики детского туберкулеза

Полимеразная цепная реакция – точный, но дорогостоящий метод диагностики туберкулеза. ПЦР проводится после бронхоскопии.

Рационально проведение полимеразной цепной реакции после получения отрицательных результатов. Результаты оцениваются после трехкратного посева мокроты на микобактерии туберкулеза. При самых благоприятных условиях выявление возбудителя свидетельствует об инфицированности. Назначение химиопрофилактики позволяет избежать активного туберкулезного процесса при наличии палочки Коха.

При получении штамма микроорганизма возможен посев на антибиотикочувствительность. Определение антибиотиков, способных уничтожать микроорганизмы, позволяет оценить, какими препаратами проводить лечение инфекции.

ПЦР у детей проводится при отрицательных результатах посева, но при наличии виража туберкулиновой пробы, визуализации рентгенологических признаков инфицирования, выявлении клинических симптомов текущей инфекции.

Полимеразная цепная реакция обеспечивает высокую точность (около 99%). Метод основан на амплификации нуклеиновых кислот. У микобактерий, вирусов и других микроорганизмов существуют уникальные последовательности нуклеотидов. Их диагностика позволяет выявить возбудителя заболевания.

Чувствительность пцр у детей менее низка, чем у взрослых. На практике выявлены следующие особенности полимеразной цепной реакции у ребенка:

  1. Специфичность – 80-100%;
  2. Чувствительность – 25-80%.

Несмотря на высокую достоверность метода, получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулеза у детей. Более рационально использование способа у пациентов с иммунодефицитными состояниями. При диагностике внелегочных форм туберкулезной инфекции.

Ошибки при интерпретации определяется нарушениями при заборе и подготовке материала для исследования.

Причины отрицательного результата пцр при диагностике туберкулеза

Распространение микобактерий по организму лимфогенным (по лимфатическим сосудам) и гематогенным (по кровеносному руслу) путем обеспечивает заселение многих тканей, появление внелегочных очагов инфекции.

При рентгенологическом определении очагов распада (деструкции) в легких нет необходимости проведения пцр. У взрослых с использованием рентгенографии можно выявить запущенные формы с высокой степенью достоверности.

У детей пцр исследование применяется чаще вследствие скрытой локализации микобактерий внутри лимфоузлов, что приводит к получению отрицательных результатов при применении других способов диагностики. При бактериальном посеве достаточно выявления около 10 микроорганизмов. Нужно учитывать, что не все отвечают за активный туберкулез легких.

Для правильной диагностики пцр, бактериального посева, дст следует соблюдать требования:

  1. Хранить материал в стерильных пробирках;
  2. Исключать попадание других бактерий;
  3. При транспортировке соблюдать личную гигиену для предотвращения попадания биоматериала на тело, лицо, в дыхательные пути.
Как проводить профилактику туберкулеза по СанПин

Храниться кровь вместе с консервантом ЭДТА. Существуют уникальные особенности приготовления материала для каждого лабораторного анализа, с которыми знакомы специалисты.

Инновационные методы диагностики

Раннее определение инфекции позволяет провести своевременную химиопрофилактику, предотвратить тяжелое течение заболевания.

Стертость клиники в детском возрасте, недостаточные результаты анализов, неграмотная интерпретация при оценке проб не позволяет своевременно верифицировать инфекцию. Для предотвращения детской заболеваемости требуется тщательный анализ результатов с возможностью установки диагноза на раннем этапе.

Современный способ лабораторной диагностики туберкулеза у детей – выявление TAB-TM

Реакция на определение Т-клеточного маркера у детей под названием «TAB-TM» характеризуется высокой чувствительностью. Суть метода заключается в выявлении особого кластера дифференцировки (CD-27), локализованного на поверхности Т-лимфоцитов. После выделения этого фактора проводится окрашивание цитокинов с цитометрией.

Метод в литературе стал описываться с 2014 года. Результаты наблюдений свидетельствуют о высокой чувствительности метода. Определение TAB-TM является экспресс методом диагностики туберкулеза путем исследования мокроты.

Анализ крови на туберкулез – что показывает

На начальном этапе туберкулезная инфекция протекает без специфической клинической симптоматики. Лабораторная диагностика у детей становится возможной тогда, когда палочка Коха размножается.

Какие клетки оцениваются при туберкулезном процессе в лабораторном анализе крови:

  1. Эритроциты – красные клетки крови, отвечающие за перенос кислорода к тканям. При легком течении легочного туберкулеза со стороны красного ростка крови патологических изменений не прослеживается. Наличие деструктивного очага способствует кровотечению с анемией крови. Состояние развивается при туберкулезном воспалении стенки кишечника. Количество ретикулоцитов на фоне патологии увеличивается больше 1%;
  2. Лейкоциты увеличиваются при любой инфекции. Лейкоцитоз сопровождается сдвигом лейкограммы влево. Повышение числа сегментоядерных нейтрофилов прослеживается на начальной стадии. При тяжелом туберкулезе с гнойным расплавлением, иммунодефицитных состояниях наблюдается лейкопения (снижение числа лейкоцитов крови). Одновременно повышается содержание лимфоцитов (свыше 20%);
  3. Эозинофилия может прослеживаться на начальной стадии. Состояние возникает при туберкулезных инфильтратах разных органов. Тяжелое течение туберкулеза с распадом у взрослых приводит к полному отсутствию эозинофилов;
  4. Повышение базофилов.

Лабораторный анализ на туберкулез не является специфичным ни для детей, ни для взрослых. Подобные изменения характерны для многих бактериальных или вирусных инфекций.

Как выбрать эффективные препараты при отравлении

Показатели гемограммы предоставляют интерес для фтизиатров для определения стадии туберкулезного инфицирования.

При активной инфильтрации прослеживается лейкоцитоз вследствие увеличения количества нейтрофилов. В клетках появляется патологическая зернистость, что свидетельствует об интоксикации крови.

Очаги распада приводят к уменьшению числа эозинофилов, нейтрофилов, молодых форм, лимфоцитов. При диссеминации возникает абсолютный моноцитоз. На фоне рассасывания увеличивается число лимфоцитов и эозинофилов.

При уплотнении очагов гемограмма не характеризуется изменениями.

Анализы у детей на туберкулез: туберкулинодиагностика

Длительное время фтизиатры ставили реакцию Манту. Такие анализы на туберкулез позволяли выявлять не только активную инфекцию, но и инфицирование. Суть пробы заключалась в подкожном введении туберкулина – вещества, которое обуславливало аллергизацию организма. Для теста применялся материал, получаемый из Micobacterium Bovis. После подкожной инъекции получается папула, которая отражает реакцию организма на проникновения микобактерии:

  1. Нормальная папула – размер от 5 до 16 мм;
  2. При отсутствии реакции – ослабление иммунитета, отсутствие микобактерии;
  3. Большая папула – наличие антигенов бактерии, контактирование с носителем туберкулезной палочки.

Метод не считается надежным из-за большого количества ложноположительных реакций. При сомнительных результатах требовалось подтверждение пцр. С появлением диаскинтеста (дст) ситуация изменилась. Сочетанное использование способов позволяет получить более достоверные результаты.

Классические «фтизиатрические» способы диагностики туберкулеза

Фтизиатры для диагностики туберкулеза у детей и взрослых используют следующие анализы:

  • Изучение анамнеза пациента (контакт с больным или носителем туберкулезной палочки). Определение социальных факторов риска помогает предположить возможное инфицирование;
  • Оценка туберкулиновой чувствительности (проба Манту) с PPD туберкулином в дозе 5-10 ТE. Оценка результата проводится через 48-72 часа;
  • Рентгенологическое исследование проводится у детей и взрослых при подозрении на туберкулез, вираже туберкулиновых проб;
  • Бактериологический посев является неопровержимым доказательством инфекции, спровоцированной микобактерий туберкулеза. При правильном сборе мокроты, обнаружении возбудителя в промывных водах желудка анализы на туберкулез можно считать положительными. Палочка Коха обнаруживается в гнойных абсцессах, лимфатических узлах, асцитическом выпоте, плевральном экссудате, моче, цереброспинальной жидкости;
  • Скорость оседания эритроцитов увеличивается при любой инфекции, в том числе туберкулезе;
  • ПЦР позволяет выявить специфического возбудителя, но исследование дорогостоящее;
  • Диаскинтест определяет легочный туберкулез, но часто дает отрицательные результаты при внелегочной локализации инфекции.

Современная диагностика туберкулеза при применении комплекса методов позволяет с высокой степенью достоверности определить микобактерию в организме. С помощью существующих способов выявляется активный процесс или инфицирование. Нужно лишь вовремя обратиться к специалистам!

vnormu.ru

Что такое ПЦР анализ на туберкулез

Инновационный метод выявления микроорганизмов, в конце прошлого столетия изобретенный ученым Кэри Муллисом – анализ ПЦР. Он получил за свои труды Нобелевскую премию. Полностью этот процесс имеет название полимеразой цепной реакции. Он заключается в восстановлении типа микроорганизма в предоставленном биоматериале по коротким фрагментам ДНК. Это позволяет выявить инфицирование на ранней стадии и сразу начать лечение, не доводя до появления серьезных симптомов и осложнений.

В чем заключается анализ

Диагностика методом ПЦР заключается в получении сегментов патогенной ДНК из биологического материала и выстраивание их в правильную цепочку. Это позволяет идентифицировать микроорганизм, которому принадлежат клетки.

Процедура проводится в три этапа:

  1. Сбор биологического материала.
  2. Выявление и выстраивание ДНК.
  3. Распознавание инфекции.

Для этого исследования требуется специальное медицинское оборудование – амплификатор. Он оснащен камерой, где исследуемый материал взаимодействует с высокой температурой и химическими ферментами. На выходе лаборант имеет длинную цепочку ДНК возбудителя болезни, если таковой имеется в организме человека.

Как подготовиться к диагностике

Анализ ПЦР – это сложный генно-инженерный процесс, требующий аккуратности и серьезного отношения, как от лаборантов, так и от пациентов. Большую роль в корректности результатов анализа играет подготовка к процедуре, то есть правильный сбор материала.

Основными источниками для получения информации о болезни являются:

Могут использоваться и другие варианты, жидкости при необходимости берутся на анализ из разных органов.

Для пациента предусмотрены определенные правила, которые нужно выполнять перед процедурой. Если предстоит анализ крови, то запрещается за 8 часов до сбора:

  • употреблять пищу;
  • курить;
  • пить алкогольные напитки;
  • принимать внутрь лекарственные средства.

Вечером перед сбором мокроты выпивается препарат для ее разжижения и облегчения отхаркивания. Утром собрать материал после тщательных гигиенических процедур полости рта.

Моча собирается в стерильную баночку утром натощак, после подмывания, до приема каких-либо медикаментов.

Если человек принимает антибиотики, то проведение анализа полимеразной цепной реакции следует отложить, иначе результат ПЦР не является достоверным. Сдавать мокроту или кровь следует спустя две недели после окончания курса лечения.

Как происходит процесс выявления бактерий

Если описать кратко, то процесс заключается в выделении части ДНК. Применение современных методов генной инженерии позволяет определить вид микроорганизма. Причем материала для анализа нужно небольшое количество.

Технически это очень сложная процедура, но она занимает меньше времени, чем классические бактериологические исследования. Возбудителей не нужно выделять из биоматериала, нет нужды растить их в течение нескольких недель. В день сдачи пациент уже может узнать результат своего анализа.

Весь процесс ПЦР протекает поэтапно:

  1. Ведется работа с первичной формой ДНК, которая при высокой температуре, близкой к 100 градусам, делится на две цепочки.
  2. Температура понижается, нити соединяются с фрагментами нуклеиновой кислоты – праймером.
  3. Происходит элонгация – синтез молекулярной структуры.

Весь сеанс состоит примерно из тридцати таких процедур, повторяющихся циклом как цепная реакция. Это необходимо для создания того количества клеток, при котором полученные бактерии станут распознаваемы.

Заключение по итогам исследования

Описание результата ПЦР (полимеразной цепной реакции) дает фтизиатр, она бывает простой или развернутой. В первом случае описание будет содержать только информацию о наличии или отсутствии палочки Коха. Если расшифровка подробная, из нее можно узнать степень распространения болезни, ее очаг. По этим критериям можно определить наиболее подходящее лечение туберкулеза в каждом случае.

Анализ полимеразой цепной реакции не различает живых и мертвых возбудителей, а говорит только об их наличии. Поэтому имеет смысл сдавать повторный тест на туберкулез только через 3-4 недели после прохождения назначенной врачом терапии.

Если результат положительный, на заключении ставится надпись «Mycobacterium tuberculosis». При отрицательном результате, рядом с биологическим названием бактерии есть пометка «не обнаружены». Анализы могут оказаться ложноположительными. Такое происходит редко – при нарушении техники выполнения исследований ПЦР или при наличии нежизнеспособных микроорганизмов. Окончательный вывод о заболевании может сделать только врач-фтизиатр.

Преимущества метода

ПЦР-диагностика туберкулеза завоевала популярность по многим причинам. Она имеет массу достоинств, среди которых:

  1. Точность исследования. При проведении анализа с соблюдением технологии удается выявить бактерии, даже если они присутствуют в малом количестве.
  2. Быстрый результат. Весь процесс от сбора материала до готового заключения занимает около 5 часов. Если сравнить с посевом, его приходится ждать до нескольких недель.
  3. Полная безопасность для человека, в отличие от флюорографии с ее облучением.
  4. Используется любой жидкий биоматериал. Для осуществления ПЦР при туберкулезе легких наиболее точную информацию дает мокрота, при туберкулезном менингите берется образец из спинного мозга. Анализ крови помогает выявить местные очаги инфекции.
  5. Проверяется чувствительность бактерий к антибиотикам. Это позволяет назначить правильное лечение.
  6. Ранняя диагностика. Узнать о наличии заболевания можно до появления ее симптомов.

Кроме положительных моментов есть и недостатки. Главный из них – это цена. Анализ ПЦР не из дешевых, что связано с использованием дорогого оборудования. Еще один минус – необходимость выжидать время для проведения повторного теста после курса лечения от туберкулеза. Иногда результат проверки получается ложноположительным. Такое бывает из-за мутации бактерий.

В каких случаях ПЦР необходим

ПЦР на туберкулез легких не имеет противопоказаний и абсолютно безопасен. Поэтому есть определенные ситуации и заболевания, когда это единственная возможность исследования.

К ним относятся:

  • беременность;
  • контакт с туберкулезным больным;
  • трудности в определении диагноза при заболевании легких;
  • обследование перед операцией;
  • аллергическая реакция;
  • ВИЧ-инфекция;
  • малолетний возраст.

Воспользоваться методом ПЦР можно по направлению, которое выдается в фтизиатрии, а также педиатром, терапевтом или пульмонологом.

Чем можно заменить ПЦР-диагностику туберкулеза

Другие виды обследования не изжили себя, а продолжают использоваться. Их применяют в тех случаях, когда нет возможности выполнить ПЦР на туберкулез. К тому же современный метод неидеален, иногда его показатели подвергаются сомнению и требуют перепроверки.

Определить наличие туберкулеза у человека помогают следующие способы:

  • туберкулинодиагностика (Манту);
  • флюорография;
  • тестирование биологического материала на флору;
  • рентген легких.

Эти исследования являются бесплатными и доступными для каждого. Но у них есть свои недостатки:

  • Тест на туберкулез вызывает аллергию. Противопоказан при заболеваниях кожи.
  • Рентгенологические исследования сопровождаются облучением, что неприменимо к детям, людям с иммунодефицитом и беременным женщинам.
  • Бактериологические анализы занимают гораздо большее количество времени, результата можно ждать до месяца.

Альтернативные варианты не являются гарантией стопроцентно правильного заключения. Они чаще всего используются в профилактических целях. Диагностирование туберкулеза методом ПЦР дает наиболее достоверную информацию. Если есть возможность, то лучше воспользоваться именно им.

Особенности туберкулеза у детей и необходимость ПЦР

Ребенка следует особенно оберегать от заболевания – туберкулезная инфекция может нанести серьезный вред организму с еще не совсем сформировавшимся иммунитетом.

После попадания палочки Коха в детский организм развитие заболевания проходит такие стадии:

  • Латентная. Продолжается до года, не выдавая себя никакими симптомами.
  • Интоксикация. Сказывается на общем состоянии здоровья. Появляется слабость, апатия, отсутствие аппетита, сонливость и снижение работоспособности. Постоянно немного повышена температура.
  • Первичная форма заболевания. Туберкулез локализуется, образуя очаг заболевания. У ребенка возникает кашель, одышка, головная боль, увеличение лимфоузлов.
  • Туберкулезный бронхоаденит. Симптомами являются боль в лопатках, кашель с разной тональностью звука, хрипы.

Обычно для выявления инфекции под кожу ребенка вводится туберкулин. Если к этому виду обследования имеются противопоказания, то ПЦР на туберкулез – незаменимый вариант для диагностики. Дети обычно сдают анализ крови, но при необходимости собирается и мокрота. При малейшем подозрении на наличие туберкулез проводятся дополнительные исследования, чтобы убедиться в положительном результате и сразу начать лечение на ранней стадии, не допуская развития болезни.

Современные методы исследования всегда быстрее и надежнее. Жаль, что из-за дорого оборудования сделать такие анализы есть возможность не во всех медицинских учреждениях и населенных пунктах. Каким способом провести обследование обычно выбирает врач, но и у пациента есть право выбора. Если вам приходилось сдавать анализ ПЦР, расскажите об этом в комментариях. Если статья оказалась для вас полезной, поделитесь ей в соцсетях – возможно, она поможет вашим друзьям.

chahotkinet.ru

Диагностика туберкулеза у детей

Так как туберкулез в наше время стал распространенным заболеванием, то важно рассмотреть методы диагностики туберкулеза у детей. Это позволит на самых ранних стадиях выявить болезнь. Как результат, будет начато своевременное лечение.

Благодаря такому подходу можно избежать серьезных осложнений.

Сначала определим основные способы диагностики туберкулеза у детей. Первое, что сделает врач, если к нему обратятся с жалобой, это осмотрит пациента.

Клинический осмотр поможет выявить признаки болезни. К примеру он обратит внимание, что ребенок похудел. Также проверит, в каком состоянии находятся лимфатические узлы, нарушена ли амплитуда движений грудно клетки, когда больной дышит.

Такой осмотр не может дать достоверного результата. Для этого необходимы другие анализы.

Но благодаря такому подходу можно определить, нужно ли отправлять пациента специально обследоваться. К тому же врач приблизительно узнает, какова клиническая картина недуга.

Затем проводится ранняя диагностика туберкулеза у детей, которая подразумевает качественное обследование. Ее проводят, когда были замечены следующие симптомы:

  1. Кашель на протяжении долгого времени.
  2. Отхаркивание кровью.
  3. Повышенная температура.
  4. Потливость.
  5. Ребенок постоянно устает.
  6. Снизилась работоспособность.

У больного спросят, не было ли у него контакта с теми людьми, которые уже имеют диагноз туберкулеза. При подозрении на туберкулез, ребенка отправляют проходить обследования.

Для взрослых обычно назначают рентген. Благодаря ему можно узнать, есть ли очаги поражения в легких. Для детей же есть другие методы.

Реакция Манту практикуется уже долгое время. С помощью ее определяют наличие микобактерии туберкулеза.

В чем суть метода

Под кожу ребенка вводят туберкулин. Это антиген микобактерии болезни.

Размеры папулы, которая получилась, помогают определить реакцию иммунитета:

  1. Для нормального показателя она должна быть примерно 5-16 мм.
  2. Если папула вовсе отсутствует, то делается следующий вывод: микобактерия отсутствует в организме или иммунитет не способен произвести реакцию на антиген из-за того, что сильно ослаблен. В последнем случае важно провести дополнительную диагностику.
  3. Если организм уже имеет клетки антигенов или если ребенок контактировал с человеком, страдающим туберкулезом, то папула будет иметь размеры больше 16 мм.

Но этот метод не имеет высокий показатель надежности, ведь были случаи, когда результаты показывали неправдивую картину. Поэтому активно начала применяться ПЦР диагностика туберкулеза у детей. В чем суть метода, рассмотрим далее.

Другими словами это полимеразная цепная реакция. Она имеет больший приоритет по сравнению с пробой Манту.

Однако имеет специфический подход. Она способна диагностировать туберкулез разных типов локализации и это дает возможность получить более точный результат.

Генная инженерия

Этим методом выявляются вирусные заболевания. Основой методики являются методы генной инженерии.

Ее активно применяют в таких отраслях медицины, как:

  • — микробиология;
  • — иммунология;
  • — вирусология.
  • к

Методика является универсальной. Небольшое количество материала позволяет установить точный диагноз. Примечательно, что выявление инфекции возможно на первых ее стадиях – в первые часы.

Благодаря этому можно выявить болезнь до того, как проявится ее симптоматика.

Метод имеет следующую суть:

  1. Специалист получает фрагменты генома (частицы ДНК) для материала исследования.
  2. Затем происходит биосинтез материала.
  3. И после этого можно определить класс микроорганизмов, которые получили во время этого молекулярно-генетического метода.

На первый взгляд может показаться, что процесс сложный. Однако по времени он будет меньше, в сравнении с другими способами.

Выявление микроорганизма происходит практически сразу – спустя несколько часов. При этом не нужно делать анализы, чтоб выделить их из среды.

Также нет необходимости выращивания их в искусственной питательно среде. Главное иметь для анализов маленькую часть фрагмента нити ДНК (возбудитель инфекции). Проводится исследование в пробирках.

Для того, что провести это исследование необходимо иметь в наличии выделения человека:

  • — мокроту;
  • — слизь;
  • — кровь;
  • — эякулят;
  • — содержимое желудка.
  • к

Весь этот материал помещают в специальный физиологический раствор. После чего происходят три этапа анализа.

  1. Выделяются фрагменты ДНК при помощи специально подобранной жидкости.
  2. Происходит помещение раствора в термостат. Там его подвергают амплификации фрагментов ДНК.
  3. Распознают ДНК возбудители, которые провоцируют заболевание.
Недостаток метода

Есть один недостаток этого метода. В результате обследование невозможно отличить живой возбудитель от мертвого.

То есть больной, который уже вылечился от болезни обычно имеет в организме эти остатки. А из-за анализа можно ошибочно определить, что в нем еще есть инфекция.

Для того, что убедиться в правдивости результата проводят серологическое исследование.

Диагностика туберкулеза у детей по крови может быть разных видов. Вот распространенные методы:

Иммуноферментный анализ

Определяет наличие антител к бактерии, вызывающей туберкулез. То есть анализ помогает узнать, способен ли организм сам оказывать сопротивление.

Параллельно с этим исследованием необходимо проводить и другие. Точности этот анализ не гарантирует.

Получить его результат можно спустя пару часов. Однако используется он только в тех местах, где люди редко инфицируются.

Общий анализ

Сбор этого анализа происходит при воспалительном процессе, когда точно не известно по какой причине он происходит. По этому анализу невозможно определить проявление туберкулеза.

Однако с помощью его определяют, увеличены ли лейкоциты и палочко-ядерные нейтрофилы.

Если это так, то есть подозрение на инфицирование.

Сейчас распространены современные методы диагностики туберкулеза у детей. К таким можно отнести квантифероновый тест. Он способен выявить активный и скрытый туберкулез.

На основе этого лабораторного метода выявляется наличие в крови специфического интерферона, свидетельствующего о наличии болезни.

Проводят исследование в пробирке, что позволяет избежать погрешности, ведь на анализ не влияют внешние факторы. Если результат положительный, то это 100% показатель наличия инфекции.

Для этого метода не характерны противопоказания и побочные реакции. Болезнь и вакцинация ребенка не влияет на результат.

Т-клеточный маркер туберкулеза

Другим методом, который стал известен совсем недавно, является ТАМ-ТВ. Дословная его расшифровка Т-клеточный маркер туберкулеза.

Для определения заболевания производится целый ряд сложных лабораторных исследований. Благодаря ему происходят реакции между клетками в организме, и выявляется есть ли в них кластер. По этому определят присутствие болезни.

И хотя методика появилась недавно, ее уже активно используют. Это высокочувствительный метод. Его применяют даже тогда, когда исследование мокроты показало отрицательный результат.

У некоторых детей не удается взять для исследования мокроту, но эта методика позволяет проводить экспресс-диагностику и в таком случае.

Диаскинтест

Есть и дополнительные методы диагностики туберкулеза у детей. К примеру, диаскинтест.

Актуален в тех случаях, когда необходимо исключить ложную реакцию Манту. У этого метода есть определенные плюсы:

  • — способность уточнить реакцию Манту;
  • — исключение возможной ошибки;
  • — проведение анализа для тех, кто против Манту.
  • к

Этот тест поможет определить точный показатель заболевания. Ведь бывает, что ребенок заражен непатогенным видом микобактерии. Она может быть похожа на туберкулезную, но не вызывает заболевания.

Возможно применения обследования для тех детей, которые прошли пробу Манту и в результате получили резко положительную реакцию.

Если реакция Манту спорная и вызывает много сомнений, то используют этот тест.

Есть дети, которые имеют аллергию на туберкулин, а это может мешать достоверным исследованиям. Для таких детей не рекомендуется делать пробу Манту, но Дискинтест для них будет спасением.

Результат обследования будет точным и выявит инфекцию именно у того ребенка, который на самом деле болен. Проводят обследование в основном после того, как провели пробу Манту, чтоб уточнить ситуацию.

Как видно, диагностика туберкулеза у детей без манту также возможна и показывает даже более достоверные результаты.

moilegkie.com

ПЦР на туберкулез: диагностика, анализ крови, вместо Манту ребенку, тест мочи, мокроты

В случае подозрения на заболевание лучше сразу сдать анализ ПЦР на туберкулез. Во время этого исследования берется кровь, которая проверяется под микроскопом. Полимерная цепная реакция все чаще стала заменять пробу Манту, чтобы выявить туберкулез.

Преимущества метода

Данный анализ уже через несколько часов определяет наличие возбудителя. Кроме того, если в организме будет присутствовать малое количество бактерий, данный метод все равно сможет их выявить.

Основным достоинством теста ПЦР являются следующие положительные моменты:

  1. Болезнь выявляется в 100% случаев.
  2. Специфичность ДНК МБТ высока.
  3. Анализ выявляет возбудителя за 4-4,5 часа.
  4. Успешно диагностируется туберкулез легких, с чем не могут справиться другие методы.
  5. Возможность выявления определенного фрагмента, который содержится в данном возбудителе.

Полимерная цепная реакция дает возможность не только своевременно выявить возбудителя и начать лечение больного, она позволяет вовремя изолировать человека от общества в случае заражения. Палочка Коха — возбудитель туберкулеза — может находиться в организме где угодно. И лишь ПЦР анализ позволяет выявить ее в месте нахождения.

Исследование ПЦР также дает возможность подобрать лекарственный препарат в зависимости от чувствительности микроорганизмов.

Описание болезни

В ХIХ веке туберкулез называли чахоткой. Болезнь представляет собой инфекционное поражение внутренних органов, преимущественно легких. Туберкулез передается воздушно-капельным путем при чихании и кашле. Объектом заражения может быть как человек, так и животное.

После проникновения бактерий туберкулеза в организм болезнь длительное время может протекать в скрытой форме.

В зависимости от степени воздействия заболевшего человека на окружающих различают 2 формы заболевания:

  1. Закрытая форма туберкулеза. Она не является опасной, т.к. человек не может заразить окружающих. Даже в анализах, в т.ч. и ПЦР, микобактерии заболевания не выявляются. Но все же опасность при данной форме присутствует, т.к. в любой момент закрытая форма может перейти в открытую. Такая активная форма туберкулеза может быть опасна не только для самого больного, но и для окружающих.
  2. Открытая форма инфекции. При ней в биологических жидкостях человека выявляется палочка Коха. Больной туберкулезом на этой стадии несет особую угрозу для окружающих. Заразиться можно даже в том случае, если носитель тщательно следит за собой в плане гигиены.

К наиболее распространенным методам исследований, проводимых для выявления болезни, относятся:

  1. Флюорография.
  2. Томография грудной клетки или других пораженных мест.
  3. Рентгенографическое исследование.
  4. Исследование биологических материалов больного.
  5. Туберкулиновая проба (Манту).

К наиболее эффективным способам выявить палочку Коха относится молекулярно-генетический анализ полимеразной цепной реакции — ПЦР диагностика туберкулеза.

Исследование на туберкулезную инфекцию

Полимеразная цепная реакция — это наиболее точный молекулярно-генетический анализ. Если произошло заражение туберкулезной инфекцией, полимерный тест исследования позволяет точно выявить ДНК или РНК возбудителя болезни. Для этого необходимо сдать кровь или другую биологическую жидкость.

Чтобы определить наличие туберкулеза, достаточно минимального количества бактерий, подойдет даже 1 клетка.

К другим преимуществам ПЦР диагностики относятся следующие:

  1. При проведении данного анализа используется особый фермент, благодаря которому выявляется точное присутствие туберкулезной инфекции.
  2. Анализ ПЦР особо чувствителен к микобактериям инфекции, поэтому точность диагностики приравнивается почти к 100%.
  3. Уже через 3,5-5,5 часов после того, как тест проведен, можно будет узнать результаты анализов.

При таком заболевании, как туберкулез, очень важно выявить патологию на ранних ее стадиях. Поэтому тест на полимеразную цепную реакцию является наиболее информативным в этом случае. Когда бактерии только начинают атаковать, следует выявить их как можно раньше, пока их воздействие не затронуло жизненно важные функции внутренних органов.

Анализ ПЦР имеет еще 1 преимущество перед другими видами исследования: методика определяет чувствительность микроорганизмов к тому или иному лекарственному препарату, что позволяет терапии быть наиболее эффективной.

Подготовка к сдаче анализов на ПЦР

Если сдается слюна, то требуется подготовка к этому. За 12 часов перед процедурой необходимо отказаться от курения, алкоголя, приема лекарств и еды. Чистка зубов, полоскание рта различными освежителями и даже применение зубной нити запрещены. Также нельзя использовать губную помаду и жить половой жизнью. Следует ополаскивать ротовую полость кипяченой водой.

Не только туберкулез выявляется при помощи метода ПЦР. Тем же способом можно обнаружить и такие не менее серьезные недуги, как герпес, хламидии, мононуклеоз, пневмонию, бароллеоз, ВИЧ, гепатит, краснуху.

Чаще всего берется кровь из вены, но в некоторых случаях может понадобиться совершенно другой биологический материал:

  1. Слюна.
  2. Анализ мочи.
  3. Соскоб из любой части тела.
  4. Половые выделения.
  5. Кал.
  6. Спинномозговая жидкость.
  7. Взятие мокроты из бронхов при отхаркивании.
  8. Анализ слизи.

Но самым информативным методом ПЦР все-таки является анализ крови на туберкулез.

Сбор биоматериала

Несмотря на то что процедура выявления возбудителя по методу ПЦР занимает всего 4-4,5 часа, она относится к наиболее сложным видам диагностики. Многие факторы могут повлиять на точность результатов. Например, собирать образцы на исследование необходимо по определенным правилам. Основным из них является повышенная стерильность при сборе биологического материала. Поэтому данный анализ сложно проводить маленькому ребенку.

Если берется образец в качестве крови из вены, то специалист проводит анализ крови на ПЦР на туберкулез не только стерильным шприцем, но и по всем правилам соблюдения общей гигиены.

Кровь собирается в специальную пробирку и на протяжении всего исследования хранится в таких условиях, которые препятствуют ее свертываемости.

Если это анализ ПЦР мочи на туберкулез, то жидкость собирается рано утром, когда человек только проснулся. Перед походом в туалет больной принимает душ и после этого берет стерильную емкость для сбора урины.

В случае взятия соскоба с половых органов, как у женщин, так и у мужчин, вся процедура проводится в условиях медицинского учреждения.

Существуют и более сложные анализы, например взятие жидкости из спинного мозга. В этом случае все действия проводятся в условиях стационара опытными врачами.

Чаще всего прохождение анализа полимерной цепной реакции назначается в таких случаях:

  1. Чтобы диагностировать болезнь в легочной ткани.
  2. Чтобы выявить источник заболевания.
  3. Чтобы определить болезнь за пределами легких.
  4. С целью диагностики рецидивов болезни.

Последовательность выполнения теста

Диагностика туберкулеза у детей и взрослых при помощи полимерной цепной реакции проходит следующие этапы:

  1. В определенных ситуациях берется различный материал на исследование. Это может быть кровь, мокрота или промывная жидкость из бронхов.
  2. После этого взятый биологический материал в течение определенного времени (чаще всего это несколько минут) подвергают воздействию высоких температур (до +97°С). В результате разрушается первоначальная структура ДНК микроорганизма, которая состоит из 2 цепей.
  3. После этого температура начинает снижаться, это действие называется отжигом. В это время праймер соединяется с 1 из разъединенных цепей.
  4. В завершение проводится элонгация. Во время нее происходит необходимый биологический синтез существующих молекул.

Понадобится 25-30 циклов, чтобы получилось необходимое количество копий ДНК на микобактерии туберкулеза.

Для процедуры необходимо дорогостоящее оборудование, поэтому не во всех медицинских учреждениях имеется возможность проводить тест ПЦР на туберкулез вместо Манту.

Благодаря прививкам и исследованию ПЦР (вместо Манту) можно предотвратить развитие такого опасного недуга, как туберкулез. Теперь не понадобится дожидаться начала проявления болезни или делать снимки на рентгеновском аппарате. Если появляются подозрения на инфицирование, для исключения страшных последствий болезни всегда можно сделать тест ПЦР, который с максимальной точностью определяет состояние организма. В условиях реального времени такие формы диагностики, как проба Манту и флюорография, постепенно отходят на второй план по сравнению с методом ПЦР.

tuberkulez.pro

ПЦР диагностика туберкулёза

Туберкулёз — специфическая инфекция, его очаг может находиться в тканях человека годами, а после чего распространиться в течение нескольких месяцев. Это хроническое заболевание, оптимальные схемы лечения которого сложно подобрать. Одна из причин этого — запоздавшая диагностика, когда микобактерии, находясь в организме человека, уже адаптировались ко многим препаратам.

Какие современные методы постановки диагноза существуют? ПЦР диагностика — что это такое? Как проводится это исследование? В каких случаях туберкулёз диагностируется этим методом и в чём его суть?

Что такое ПЦР диагностика

Это один из самых современных методов диагностики не только заболеваний, но и обнаружения биологического материала. ПЦР диагностика была изобретена относительно недавно. Около 30 лет назад в 1983 году американский биохимик Кэри Бэнкс Муллис предложил сложную схему восстановления биологического материала микроорганизмов по одному краткому сегменту. Благодаря своему открытию учёный был удостоен наивысшей награды — Нобелевской премии.

Что это такое — ПЦР диагностика инфекций? Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это диагностика выявления вирусных заболеваний, основанная на методах генной инженерии. Она широко применяется в медицинской микробиологии, иммунологии и вирусологии. Метод универсальный и помогает поставить диагноз при малом количестве материала. Выявить инфекцию можно буквально в первые часы заражения ею, задолго до того, как проявятся первые симптомы заболевания.

Суть метода заключается в получении из материала от больного человека не самого возбудителя, а фрагментов генома (частиц ДНК), его биосинтезе с последующим определением к какому классу микроорганизмов принадлежит полученный генетический материал с помощью молекулярно-генетических методов.

Несмотря на то что это сложный процесс, он занимает намного меньше времени, чем многие биологические способы обнаружения возбудителей инфекций. В течение всего нескольких часов с помощью ПЦР удаётся обнаружить микроорганизм. Для этого нет необходимости выделять его из среды (крови, спинномозговой жидкости, мокроты) и долго выращивать на искусственных питательных средах. Достаточно чтобы в исследуемом материале присутствовал небольшой фрагмент нити ДНК возбудителя инфекции.

В основе реакции лежит возможность в искусственных условиях (в пробирке) создать синтез молекул нуклеиновых кислот возбудителя инфекции.

Что необходимо для проведения ПЦР?

  1. Праймеры — участки ДНК, с которых и начинается биосинтез или создание.
  2. Нуклеотиды или сложные соединения, которые являются основой молекулы ДНК либо РНК.
  3. Полимеразная цепная реакция невозможна без присутствия полимеразы, которая представляет собой фермент ускоряющий ход ПЦР.

Этапы ПЦР диагностики

Как проводится молекулярная диагностика методом ПЦР? Процедура несложная и занимает короткий промежуток времени с учётом сбора материала.

  1. Перед началом исследования берут необходимый биологический материал — это промывные воды бронхов, кровь, желудочное содержимое, мокрота. Тип биологического материала зависит от предполагаемого возбудителя.
  2. Денатурация или разрушение первичной структуры ДНК, которая состоит из двух цепочек. Суть этого этапа — разъединить две цепи под воздействием высокой температуры (максимальная — 98 ºC, которая действует не более двух минут).
  3. На следующей стадии ПЦР, под названием — отжиг, температуру снижают на несколько градусов, чтобы праймер связался с нитью ДНК.
  4. Элонгация, в процессе которой происходит непосредственно синтез нужных молекул.

В результате всего 25–30 таких циклов получают нужное количество копий ДНК микроорганизмов, которые легко распознать.

Нет возможности абсолютно всем людям с подозрением на туберкулёз проводить ПЦР, так как метод требует наличия дорогостоящего оборудования. Не все государственные поликлиники могут себе позволить купить его. Кроме этого, так сложилось, что привычные методы диагностики инфекции в большинстве случаев тоже себя оправдывают.

К ним относятся:

  • опрос пациента, сбор анамнеза;
  • полноценный осмотр человека;
  • исследование с помощью туберкулиновой пробы Манту;
  • рентгенография или флюорография;
  • компьютерная диагностика при необходимости;
  • микробиологические методы исследования: микроскопия мазка и бактериологическое исследование мокроты.

ПЦР на туберкулёз проводится в особых случаях, когда сложно поставить диагноз или нет возможности провести другие инструментальные методы.

Несмотря на изобилие способов диагностики заболеваемость туберкулёзом продолжает расти. В настоящее время отмечается не только её рост, но и другие особенности:

  • болезнь часто протекает в тяжёлой форме;
  • повышается количество летальных случаев;
  • всё чаще диагностируются устойчивые к современным химиопрепаратам формы заболевания.

Нежелание самих людей ежегодно проходить обычные профосмотры, отказ от вакцинации приводит к распространению туберкулёза. В таких условиях нужны быстрые, информативные и эффективные методы исследования, которые должны быть доступны для детей и взрослых. Все вышеперечисленные методы диагностики во многом уступают ПЦР.

Преимущества диагностики туберкулёза с помощью ПЦР

Это исследование хоть и новое, но хорошо себя зарекомендовало, особенно в спорных случаях, когда диагноз поставить невозможно по ряду причин.

Благодаря ПЦР намного легче обнаружить в исследуемом материале ДНК возбудителя туберкулёза.

Преимущества ПЦР диагностики в следующем.

  1. Это быстрый анализ. По небольшому фрагменту молекулы ДНК можно установить диагноз всего за несколько часов (около пяти), что успешно используется в экстренных ситуациях, когда, например, перед операцией нужно установить не болен ли человек туберкулёзом.
  2. Анализ ПЦР допускается в случае, когда другие методы недоступны или запрещены (для обнаружения туберкулёза лёгких иногда приходится сделать несколько рентгенографических снимков, что составит большую дозу облучения).
  3. С помощью ПЦР проводится исследование любой биологической среды на присутствие в ней возбудителя. К примеру, можно провести исследование спинномозговой жидкости, если есть подозрение на туберкулёзный менингит.
  4. Разрешена ПЦР диагностика инфекционных заболеваний в детском возрасте, так как метод безопасен.
  5. Позволяет выявить возбудителя на любой стадии развития болезни.
  6. Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить микобактерии туберкулёза, даже если в биологическом материале всего несколько микроорганизмов.
  7. Хорошо его проводить для диагностики рецидива заболевания.

После всего прочитанного ПЦР кажется практически идеальным методом диагностики, который должны делать всем с подозрением на туберкулёз. Но и здесь есть свои минусы, их необходимо учитывать.

Недостатки ПЦР при диагностике туберкулёза

В наше время такая диагностика скорее редкость, чем закономерность. И для этого есть основания.

  1. Это дорогой метод исследования. Во многих поликлиниках оборудование для проведения ПЦР отсутствует из-за высокой его стоимости, но в платных лабораториях анализ всё-таки можно сделать.
  2. Сразу после проведённого лечения мёртвые микобактерии или живые в незначительном количестве могут ещё присутствовать в организме человека (при проведении ПЦР диагностики результат будет положительным), поэтому в это время метод будет недостоверным, проводить его нет смысла.
  3. Мутации микобактерий приводят к неэффективности ПЦР — не может синтезироваться нормальная последовательность нити ДНК.
  4. Нужно правильно выбирать среду для исследования, кровь берут только при подозрении на её заражение (сепсис), нет необходимости брать мокроту если под вопросом стоит туберкулёз органов нервной системы. В таком случае ПЦР не сможет обнаружить возбудителя и диагностика будет неинформативной.

Показания для выявления туберкулёза с помощью ПЦР анализа

ПЦР диагностика туберкулёза проводится чаще всего в спорных случаях. Когда врачи направляют на это исследование?

  1. Если сложно поставить диагноз обычными доступными методами, но был контакт с больным туберкулёзом.
  2. В случае, когда человека невозможно доставить на исследование в поликлинику для прохождения рутинных привычных исследований на туберкулёз, его легче обследовать с помощью ПЦР, так как мокроту для исследования можно доставить в баночке, а диагноз подтверждается в течение нескольких часов.
  3. Если человеку предстоит экстренная операция и нужно срочно выяснить болен ли он туберкулёзом.
  4. При необходимости беременную женщину тоже лучше обследовать на туберкулёз с помощью ПЦР, так как метод безопасен.
  5. На платной основе диагностику может пройти каждый, у кого туберкулёз не был подтверждён с помощью бактериологических методов и рентгеноскопии. Такое бывает, когда очаг в лёгких незаметен на прямом снимке, а человек при сдаче мокроты на исследование не смог соблюсти рекомендации по правильному забору материала. При этом человека беспокоят все симптомы, характерные для туберкулёза лёгких.
  6. Когда есть сомнения в результатах пробы Манту.
  7. Предпочтительнее делать ПЦР диагностику туберкулёза у детей. Процедура безопасна, не создаёт дополнительную лучевую нагрузку, эффективна в отношении обнаружения сложных для диагностики форм заболевания.

Своевременная диагностика туберкулёза — это залог правильно назначенного лечения и снижения распространения заболевания. Часто знакомые методы выявления болезни не всегда эффективны. Поэтому ПЦР на сегодня является одним из самых достоверных и безопасных способов обнаружения инфекции на ранних этапах её развития.

privivku.ru


Смотрите также



Услуги по созданию дизайна; верстка



© JuliettaRose, 2008-2020. При использовании материалов ссылка на источник обязательна.